Os objetivos deste estudo foram desenvolver, implementar e avaliar um ambiente virtual de aprendizagem (AVA), acerca da assistência de enfermagem no acidente ocupacional com material biológico, com base na metodologia WebQuest, voltado para educação continuada de enfermeiros de instituição hospitalar. A elaboração do AVA fundamentou-se em três etapas: concepção e planejamento, desenvolvimento e implementação. As avaliações dos enfermeiros demonstraram que a metodologia WebQuest na prática da educação continuada em serviço é atraente e eficaz, contribuindo para facilitar e agilizar tomadas de decisão em enfermagem.