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L'application de substances naturelles ayant une action bactéricide est la cible de recherches visant à une production plus durable, impliquant dans diverses sources de substances pour de nouvelles formulations thérapeutiques. Cette étude présente la caractérisation chimique, la toxicité et l'activité antimicrobienne de l'huile essentielle (OE) des feuilles de Bixa orellana Labill. L'OE a été extraite par hydrodistillation à 100 ° C pendant 3h. Les paramètres physico-chimiques ont été déterminés et la caractérisation chimique a utilisé la chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (CG/SM). L'essai de toxicité a été effectué par le bio-essai avec Artemia salina Leach. Les méthodes de Diffusion en Disque et de Dilution en Bouillon devant les bactéries Escherichia coli et Staphylococcus aureus ont été utilisées pour évaluer l'activité antimicrobienne. La CL50 dans l'essai de toxicité a été vérifiée en 355 mg L-1 et a été classée comme non toxique. L'ENP a présenté une activité antimicrobienne contre les micro-organismes testés et a totalisé 320 mg EAT g-1 de composés phénoliques totaux. Les résultats obtenus mettent en évidence l'importance de signaler ce produit comme une alternative thérapeutique, en encourageant son potentiel d'application.