A utilização de DNAzymes como biosensores funde os campos das ciências químicas e da biologia. Nos últimos anos, a DNAzymes teve um impacto significativo nos biossensores em diversas áreas, demonstrando propriedades únicas com aplicações potencialmente abrangentes, tais como a detecção de metais para aplicações teranóticas. Embora estejam disponíveis métodos analíticos padrão-ouro para detectar metais ou microrganismos no ambiente, eles envolvem um pré-tratamento de amostras demorado e complicado e instrumentos dispendiosos. Como alternativa, os DNAzymes demonstraram uma técnica de análise rápida não destrutiva com detecção em tempo real com alta sensibilidade e selectividade. A utilização de DNAzymes, uma forma de DNA catalítico como biosensor, deslocou-se para a detecção e imagem intracelular dos iões metálicos, incorporando vários métodos de transdução de sinal. Neste livro, iremos discutir abordagens gerais ao desenvolvimento de DNAzymes e selecção in-vitro de DNAzymes que correspondem ao desenvolvimento de biosensores desde o início dos anos 90 até ao presente e três áreas principais de aplicação de DNAzymes: (i) biosensagem de metais, (ii) biosensagem de microrganismos, e (iii) desenvolvimento de sistemas de termoanóstico.