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O Colossoma macropomum (Tambaqui Amazônico) é uma espécie de peixe comercial importante e intensamente cultivado em consórcio com as culturas de Oryza sativa (arroz) em uma variedade de corpos de água na área do rio São Francisco, no Nordeste do Brasil. Formulações comerciais de herbicida contendo Trifluralina (TRF) são utilizadas para controlar ervas daninha em campos de produção de arroz. O objetivo desse estudo foi avaliar a sensibilidade de C. macropomum à TRF utilizando biomarcadores para analisar os efeitos de uma exposição aguda. O herbicida apresentou um perfil de inibição dose-dependente na atividade da colinesterase-ChE do cérebro de C. macropomum. O valor estimado da CL50 em 96 h para trifluralina foi de 1,25 mimols / L. Os ensaios in vitro mostraram que a ChE cerebral teve uma moderada sensibilidade à trifluralina (2,34 mimols/ L). Os resultados indicam que a ChE do cérebro C. macropomum é um biomarcador confiável para ser utilizado no monitoramento ambiental de agrotóxicos no delta do rio São Francisco e outros rios do Brasil. Também ficou confirmado o potencial genotóxico e apoptótico da trifluralina em concentrações a partir de 1,5 mimols/L para juvenis de C.macropomum.