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Vitex negundo L. é um arbusto aromático lenhoso distribuído por toda a Índia. Todas as partes da planta possuem uma multiplicidade de metabolitos secundários e encontra utilização para o tratamento de um largo espectro de doenças de saúde na medicina tradicional e folclórica. A planta tem propriedades anti-inflamatórias, anticonvulsivantes e antioxidantes e é utilizada para o tratamento de várias doenças tais como asma, bronquite, constipação, tosse, etc. Estudos in vitro e análises fitoquímicas serão úteis para a utilização sustentável da V. negundo. Este trabalho relata a propagação in vitro da planta, juntamente com a avaliação dos constituintes fitoquímicos responsáveis pelas suas propriedades únicas e actividade antimicrobiana. Foram efectuados estudos in vitro em meio MS com várias combinações de auxina e citocinina. Foram experimentados vários explantes para indução de calos, raízes e rebentos múltiplos. O rastreio fitoquímico dos metabolitos secundários em V.negundo foi realizado juntamente com a avaliação do potencial antimicrobiano e antioxidante. Este estudo apresentou um conhecimento detalhado sobre constituintes fitoquímicos, propriedades antimicrobianas e antioxidantes, juntamente com um protocolo de rápida propagação in vitro de Vitex negundo.