A paracoccidioidomicose tem seu diagnóstico clínico confundido com outros processos infecciosos, apresenta índices expressivos de letalidade, entre 2 a 23% nos casos graves, alcançando 30% quando associada a AIDS; sendo considerada a principal causa de mortalidade entre as micoses no Brasil, apresentando média de 111,5 óbitos/ano, segundo o Sistema de Informações sobre Mortalidade, do Ministério da Saúde. Diante do exposto, é imperativo a oferta de técnicas sorológicas que permitam o diagnóstico rápido e acurado da mesma. Neste estudo, verificou-se que a metodologia de Dot-blot apresentou-se como uma ferramenta extremamente promissora não apenas como técnica de triagem sorológica, visto sua alta sensibilidade, mas também como teste de diagnóstico rápido, visto que permitiu a liberação de resultados verdadeiramente negativos em tempo inferior quando comparado ao ensaio de imunodifusão dupla em gel de agarose, ou seja, um (1) versus sete (7) dias, sendo, portanto, de grande valor diagnóstico, principalmente para o descarte da suspeita clínica para a micose em questão, além de conferir bons sinais de adaptação e uso na rotina diagnóstica pela Saúde Pública do Estado de São Paulo.