Résumé : 26 souches d actinomycètes ont été isolées à partir d échantillons de sol et d écorces d arbres prélevés d écosystèmes différents (sol de champ à Sousse, sol de sable avec végétation et sol de dune à Douz). Leur identification a été réalisée en se basant sur leurs caractères macroscopiques et microscopiques. L activité antimicrobienne a été effectuée contre deux bactéries à Gram positives et trois bactéries à Gram négatives. Elle a été réalisée par trois techniques qui se basent sur le principe de diffusion qui sont la technique du cylindre d agar, la technique des disques et la technique des puits. Parmi les 26 souches isolées, 21 souches (80.64%) ont montré une activité contre au moins une bactérie-test étudiée dont 38% ont présenté un fort effet antibactérien. Ces derniers ont comme cible majoritaire les bactéries à Gram positives.