Estrazione del DNA dal tessuto epiteliale della lumaca
Confronto tra diversi metodi di estrazione del DNA genomico nelle lumache parassite(Mollusca: Gastropoda)
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Lo scopo della ricerca è stato quello di confrontare tre protocolli: estrazione con SDS; estrazione con CTAB e 2ß-mercaptoetanolo ed estrazione con SDS e proteinasi K, per determinare il metodo più appropriato per ottenere DNA di alto peso molecolare e purezza nel tessuto epiteliale di lumache: Arion subfuscus e Deroceras reticulatum. La concentrazione e la purezza del DNA sono state stimate spettrofotometricamente (assorbanza a 260 nm e rapporto Abs260/Abs280 nm). È stato usato un disegno completamente randomizzato con sei repliche. Sono state rilevate differenze significative (p
Lo scopo della ricerca è stato quello di confrontare tre protocolli: estrazione con SDS; estrazione con CTAB e 2ß-mercaptoetanolo ed estrazione con SDS e proteinasi K, per determinare il metodo più appropriato per ottenere DNA di alto peso molecolare e purezza nel tessuto epiteliale di lumache: Arion subfuscus e Deroceras reticulatum. La concentrazione e la purezza del DNA sono state stimate spettrofotometricamente (assorbanza a 260 nm e rapporto Abs260/Abs280 nm). È stato usato un disegno completamente randomizzato con sei repliche. Sono state rilevate differenze significative (p<0,01) per quantità, concentrazione e purezza tra i protocolli. Il protocollo (SDS e proteinasi K) ha permesso di ottenere DNA con peso molecolare più elevato (2 514,90±291,56) e purezza (1,97±0,02). La qualità del DNA di ogni protocollo è stata verificata mediante PCR-RAPD, osservando poca riproducibilità per il primer OPA-02 (protocollo SDS); mentre negli altri metodi sono stati osservati profili di amplificazione ad alta risoluzione e bande riproducibili. Si raccomanda di utilizzare il protocollo SDS e la proteinasi K, per ottenere DNA genomico di alto peso molecolare, qualità e purezza nelle lumache.
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