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Cent trente six souches d'actinomycètes ont été isolées à partir de trois biotopes Tunisiens. Par des études microbiologique et chimique, deux souches TN262 et TN272 ont sélectionnées. En se basant sur les études morphologiques, moléculaires et phylogénétiques, ces deux souches ont été identifiées. Il s'agit de deux nouvelles bactéries actinomycètes du genre Streptomyces. Les conditions de production de biomolécules des deux souches TN262 et TN272 ont été optimisées. A partir de Streptomyces sp. TN272 et en utilisant plusieurs techniques chimiques, biochimiques et spectroscopiques, dix huit molécules bioactives ont été purifiées et caractérisées dont cinq isomères lipopeptidiques cycliques possèdent des activités antifongiques. A partir de Streptomyces sp. TN262, onze molécules bioactives ont été purifiées et caractérisées dont une molécule dérivée d'ester décrite pour la première fois par voie naturelle. Nous avons également induit l'expression d'une voie de biosynthèse cryptique chez cette souche ce qui a conduit à l'obtention d'une autre biomolécule, le Cyclo (L-Leu-L-Arg). Mots clés: Streptomyces, molécules bioactives, purification, caractérisation, induction.