Die Vielfalt der molekularbiologischen Methoden scheint zunächst schwer überschaubar. Glücklicherweise liegen den Methoden oft ähnliche Prinzipien zugrunde, die dieses Buch anschaulich erklärt. Praxisnah wird Wissen vermittelt über:- Grundlagen der Laborarbeit- Aufreinigung von DNA, RNA und Proteinen- Polymerasekettenreaktion und Klonierungsstrategien- Aufbau von Vektoren und Transformation- Elektrophorese von DNA, RNA und Proteinen- Immunbiochemische Methoden- Methoden für FortgeschritteneBei den vorgestellten Verfahren wird viel Wert auf deren Aktualität und auf ihre praxisnahe Beschreibung…mehr
Die Vielfalt der molekularbiologischen Methoden scheint zunächst schwer überschaubar. Glücklicherweise liegen den Methoden oft ähnliche Prinzipien zugrunde, die dieses Buch anschaulich erklärt. Praxisnah wird Wissen vermittelt über:- Grundlagen der Laborarbeit- Aufreinigung von DNA, RNA und Proteinen- Polymerasekettenreaktion und Klonierungsstrategien- Aufbau von Vektoren und Transformation- Elektrophorese von DNA, RNA und Proteinen- Immunbiochemische Methoden- Methoden für FortgeschritteneBei den vorgestellten Verfahren wird viel Wert auf deren Aktualität und auf ihre praxisnahe Beschreibung gelegt. Damit ist dieses Buch ein wertvoller Begleiter für Bachelor- und Master-Studierende im Bereich der Lebenswissenschaften. Der umfangreiche Online-Bereich bietet zusätzliche Methoden und Protokolle für den Laboralltag.
Vorwort 71 Das Leben und seine Bestandteile 111.1 Der Aufbau von DNA und RNA 131.2 Der genetische Code 161.3 Die Gene 171.4 Die Proteine 221.5 Die Zelle 272 Grundlagen der Arbeit im Labor 292.1 Wasser 302.2 Messung des pH-Wertes 312.3 Puffer 322.4 Waagen 332.5 Mikropipetten 342.6 Gefäße im Labor 362.7 Zentrifugen 362.8 Mischen und Konzentrieren 402.9 Konzentrieren 412.10 Pufferwechsel 422.11 Proben-Lagerung 422.12 Steriles Arbeiten 432.13 Die kleinen Freunde - Pflege und Aufzucht von Escherichia coli 452.14 Der Aufschluss von Geweben 503 Aufreinigung von Nukleinsäuren 533.1 Gegenspieler erfolgreicher DNA- und RNA-Isolationen 553.2 Extraktion von Nukleinsäuren 583.3 Die weitere Aufreinigung der DNA 593.4 Einige ausgewählte DNA-Aufreinigungsmethoden 663.5 Die Isolation von RNA 713.6 Übersicht über den Einsatz von Kits 743.7 Tipps zum Erzielen hoher Ausbeuten bei der Isolation von Nukleinsäuren743.8 Quantifizierung von Nukleinsäuren 754 Polymerase Kettenreaktion 794.1 Prinzip der Polymerase-Kettenreaktion 814.2 Die Komponenten der PCR 814.3 Geräte für die PCR 904.4 Die Standard-PCR 914.5 Ausgewählte PCR-Methoden 914.6 Anwendungen der PCR 1004.7 Optimierung der PCR-Reaktion 1015 Klonieren für Einsteiger 1035.1 Restriktionsenzyme 1055.2 Ligation 1135.3 Dephosphorylierung 1155.4 Die Transformation von E. coli 1175.5 Der Weg zum klonierten Gen 1195.6 Der ungerichtete Einbau einer amplifizierten DNA in einen Vektor 1195.7 Der gerichtete Einbau von DNA in einen Vektor 1225.8 Ligase-unabhängige Klonierungssysteme 1245.9 Wenn es mal nicht klappt 1256 Vektoren 1276.1 Plasmide 1296.2 Klonierungsplasmide 1326.3 Rekombinase-basierte Klonierung 1366.4 Expressionsplasmide 1396.5 Reportergene 1436.6 Phagen 1466.7 Phagemide 1476.8 Shuttle-Vektoren 1476.9 Künstliche Chromosomen: BACs, PACs und YACs 1486.10 Hefen als Klonierungs- und Expressionssystem 1496.11 Die Transformation von Pflanzen 1516.12 Die Transformation von Säugetieren und tierischen Zellkulturen 1537 Elektrophorese vonNukleinsäuren 1577.1 Agarose-Gelelektrophorese von DNA 1597.2 Die Detektion der DNA im Gel 1647.3 Präparative Agarosegele 1657.4 Auftrennen von RNA im Agarosegel 1677.5 Fehlersuche bei der Agarose- Gelelektrophorese 1688 Proteinaufreinigung 1718.1 Homogenisation 1758.2 Extraktion von Proteinen 1778.3 Dialyse und Konzentrierung 1818.4 Weitere Aufreinigungsschritte 1838.5 Quantifizierung von Proteinen 1868.6 Aufreinigungsverfahren für getaggte Proteine aus E. coli 1899 Gelelektrophorese von Proteinen 1959.1 Die Polyacrylamid-Gelelektrophorese (PAGE) 1979.2 Die denaturierende SDS-PAGE 1979.3 Das Färben der Gele 2069.4 Weitere Elektrophoreseverfahren für Proteine 2089.5 Western Blotting 2119.6 Wenn es mal nicht klappt 21410 Immunbiochemische Methoden 21710.1 Antikörper 21910.2 Prinzipien immunbiochemischer Verfahren 22310.3 Spezifische und unspezifische Bindungen 22910.4 Immunbiochemische Verfahren 23010.5 ELISA 23010.6 Immunfärbung nach Western Blot 23510.7 Immunoaffinitätschromatographie 23710.8 Weitere Antikörper-basierte Methoden 23910.9 Wenn es mal nicht klappt 24011 Molekularbiologie für Fortgeschrittene 24311.1 DNA-Sequenzierung 24511.2 Bioinformatische Sequenzanalyse 24811.3 Der Einsatz der Bioinformatik für die Klonierung von DNA 25011.4 Vollständige Sequenzen durch 3' RACE-PCR und 5' RACE-PCR 25111.5 Stammsammlungen 25311.6 Identifizierung von Nukleinsäuren durch Hybridisierung 25311.7 DNA-Chips oder Microarrays 25511.8 Veränderung von Nukleinsäuren 25611.9 Synthetische Gene 260AnhangA1 Sicherheit im Labor 262A2 Die 10 goldenen Laborregeln 263A3 Das Laborbuch und die final
Vorwort 71 Das Leben und seine Bestandteile 111.1 Der Aufbau von DNA und RNA 131.2 Der genetische Code 161.3 Die Gene 171.4 Die Proteine 221.5 Die Zelle 272 Grundlagen der Arbeit im Labor 292.1 Wasser 302.2 Messung des pH-Wertes 312.3 Puffer 322.4 Waagen 332.5 Mikropipetten 342.6 Gefäße im Labor 362.7 Zentrifugen 362.8 Mischen und Konzentrieren 402.9 Konzentrieren 412.10 Pufferwechsel 422.11 Proben-Lagerung 422.12 Steriles Arbeiten 432.13 Die kleinen Freunde - Pflege und Aufzucht von Escherichia coli 452.14 Der Aufschluss von Geweben 503 Aufreinigung von Nukleinsäuren 533.1 Gegenspieler erfolgreicher DNA- und RNA-Isolationen 553.2 Extraktion von Nukleinsäuren 583.3 Die weitere Aufreinigung der DNA 593.4 Einige ausgewählte DNA-Aufreinigungsmethoden 663.5 Die Isolation von RNA 713.6 Übersicht über den Einsatz von Kits 743.7 Tipps zum Erzielen hoher Ausbeuten bei der Isolation von Nukleinsäuren743.8 Quantifizierung von Nukleinsäuren 754 Polymerase Kettenreaktion 794.1 Prinzip der Polymerase-Kettenreaktion 814.2 Die Komponenten der PCR 814.3 Geräte für die PCR 904.4 Die Standard-PCR 914.5 Ausgewählte PCR-Methoden 914.6 Anwendungen der PCR 1004.7 Optimierung der PCR-Reaktion 1015 Klonieren für Einsteiger 1035.1 Restriktionsenzyme 1055.2 Ligation 1135.3 Dephosphorylierung 1155.4 Die Transformation von E. coli 1175.5 Der Weg zum klonierten Gen 1195.6 Der ungerichtete Einbau einer amplifizierten DNA in einen Vektor 1195.7 Der gerichtete Einbau von DNA in einen Vektor 1225.8 Ligase-unabhängige Klonierungssysteme 1245.9 Wenn es mal nicht klappt 1256 Vektoren 1276.1 Plasmide 1296.2 Klonierungsplasmide 1326.3 Rekombinase-basierte Klonierung 1366.4 Expressionsplasmide 1396.5 Reportergene 1436.6 Phagen 1466.7 Phagemide 1476.8 Shuttle-Vektoren 1476.9 Künstliche Chromosomen: BACs, PACs und YACs 1486.10 Hefen als Klonierungs- und Expressionssystem 1496.11 Die Transformation von Pflanzen 1516.12 Die Transformation von Säugetieren und tierischen Zellkulturen 1537 Elektrophorese vonNukleinsäuren 1577.1 Agarose-Gelelektrophorese von DNA 1597.2 Die Detektion der DNA im Gel 1647.3 Präparative Agarosegele 1657.4 Auftrennen von RNA im Agarosegel 1677.5 Fehlersuche bei der Agarose- Gelelektrophorese 1688 Proteinaufreinigung 1718.1 Homogenisation 1758.2 Extraktion von Proteinen 1778.3 Dialyse und Konzentrierung 1818.4 Weitere Aufreinigungsschritte 1838.5 Quantifizierung von Proteinen 1868.6 Aufreinigungsverfahren für getaggte Proteine aus E. coli 1899 Gelelektrophorese von Proteinen 1959.1 Die Polyacrylamid-Gelelektrophorese (PAGE) 1979.2 Die denaturierende SDS-PAGE 1979.3 Das Färben der Gele 2069.4 Weitere Elektrophoreseverfahren für Proteine 2089.5 Western Blotting 2119.6 Wenn es mal nicht klappt 21410 Immunbiochemische Methoden 21710.1 Antikörper 21910.2 Prinzipien immunbiochemischer Verfahren 22310.3 Spezifische und unspezifische Bindungen 22910.4 Immunbiochemische Verfahren 23010.5 ELISA 23010.6 Immunfärbung nach Western Blot 23510.7 Immunoaffinitätschromatographie 23710.8 Weitere Antikörper-basierte Methoden 23910.9 Wenn es mal nicht klappt 24011 Molekularbiologie für Fortgeschrittene 24311.1 DNA-Sequenzierung 24511.2 Bioinformatische Sequenzanalyse 24811.3 Der Einsatz der Bioinformatik für die Klonierung von DNA 25011.4 Vollständige Sequenzen durch 3' RACE-PCR und 5' RACE-PCR 25111.5 Stammsammlungen 25311.6 Identifizierung von Nukleinsäuren durch Hybridisierung 25311.7 DNA-Chips oder Microarrays 25511.8 Veränderung von Nukleinsäuren 25611.9 Synthetische Gene 260AnhangA1 Sicherheit im Labor 262A2 Die 10 goldenen Laborregeln 263A3 Das Laborbuch und die final
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