Eschericia coli jest cz¿sto u¿ywanym gospodarzem, poniewä u¿atwia ekspresj¿ biäek dzi¿ki swojej wzgl¿dnej prostocie, niedrogiej i szybkiej hodowli o du¿ej g¿sto¿ci, dobrze znanej genetyce i du¿ej liczbie dost¿pnych kompatybilnych narz¿dzi molekularnych. Zaobserwowano, ¿e znaczniki powinowactwa poprawiaj¿ wydajno¿¿ biäka, zapobiegaj¿ proteolizie i zwi¿kszaj¿ rozpuszczalno¿¿ in vivo. Oczyszczanie biäek ze znacznikiem his opiera si¿ na zastosowaniu chelatowanego jonu metalu jako liganda powinowactwa. Enterokinazy s¿ na ogó¿ stosowane do trawienia biäek fuzyjnych, poniewä rozszczepiaj¿ cel po stronie C-ko¿cowej sekwencji rozpoznawanej, umo¿liwiaj¿c cäkowite usuni¿cie sekwencji znaczników powinowactwa. Przeprowadzono badanie, w którym komórki E. coli poddano lizie za pomoc¿ ultrad¿wi¿ków w celu odzyskania rozpuszczalnego biäka fuzyjnego, a nast¿pnie przes¿czono przez filtracj¿ z przep¿ywem stycznym (TFF) przy u¿yciu modu¿u kasetowego z p¿ask¿ p¿ytk¿. Przefiltrowane biäko oczyszczono metod¿ chromatografii anionowymiennej, a nast¿pnie chromatografii pseudopowinowactwa. Biäko fuzyjne rozszczepiono przez trawienie rekombinowan¿ enterokinaz¿ w celu oddzielenia partnera fuzyjnego od biäka b¿d¿cego przedmiotem zainteresowania. Stwierdzono, ¿e cäkowity odzysk po¿¿danego biäka wyniós¿ 24,7%.
Hinweis: Dieser Artikel kann nur an eine deutsche Lieferadresse ausgeliefert werden.
Hinweis: Dieser Artikel kann nur an eine deutsche Lieferadresse ausgeliefert werden.