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Tb. Os genes da tubulina alfa e beta de brucei foram expressos em E. coli usando o plasmídeo de expressão pTrP2 e ácido 3-¿-indoleacrílico como indutor. As tubulinas expressas foram analisadas por SDS-PAGE e confirmadas por Western blotting, em que tinham uma massa molecular aparente idêntica de 50 kDa. As tubulinas expressas foram dissolvidas individualmente em Ureia 8 M e diluídas 20 vezes, após o que foram concentradas e dialisadas extensivamente contra tampão MES. Após a diálise, o rendimento médio para a tubulina alfa e beta foi de 0,7g por litro de cultura. Os anticorpos policlonais…mehr

Produktbeschreibung
Tb. Os genes da tubulina alfa e beta de brucei foram expressos em E. coli usando o plasmídeo de expressão pTrP2 e ácido 3-¿-indoleacrílico como indutor. As tubulinas expressas foram analisadas por SDS-PAGE e confirmadas por Western blotting, em que tinham uma massa molecular aparente idêntica de 50 kDa. As tubulinas expressas foram dissolvidas individualmente em Ureia 8 M e diluídas 20 vezes, após o que foram concentradas e dialisadas extensivamente contra tampão MES. Após a diálise, o rendimento médio para a tubulina alfa e beta foi de 0,7g por litro de cultura. Os anticorpos policlonais foram produzidos em cada um dos 56 coelhos imunizados com três doses de tubulinas concentradas a 150¿g ou 450¿g por imunização por animal. O efeito desses anticorpos em T. b. o crescimento de brucei foi estudado por cultura de T. b. Brucei na corrente sanguínea se forma em até 25% dos anti-soros criados em coelho. Os anti-soros dos outros coelhos não inibiram T. b. crescimento de brucei em cultura. Estes resultados mostram que os anticorpos para a tubulina tripanossômica expressa em bactérias podem não ser citotóxicos para T. b. brucei.
Autorenporträt
David Kateete (Doktorand, Makerere University, Kampala, Uganda) befindet sich derzeit in seinem letzten Ausbildungsjahr. Er interessiert sich für Pathogenbiologie und studiert derzeit Zell-Zell-Signalübertragung in Bakterien. Er ist außerdem Dozent in der Abteilung für Medizinische Mikrobiologie am Makerere University College of Health Sciences.