Os efeitos tripanocidas de anticorpos para tubulina recombinante de T.brucei
Uma avaliação da atividade tripanocida in vitro de anticorpos para a tubulina recombinante de Trypanosoma B. Brucei
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Tb. Os genes da tubulina alfa e beta de brucei foram expressos em E. coli usando o plasmídeo de expressão pTrP2 e ácido 3-ß-indoleacrílico como indutor. As tubulinas expressas foram analisadas por SDS-PAGE e confirmadas por Western blotting, em que tinham uma massa molecular aparente idêntica de 50 kDa. As tubulinas expressas foram dissolvidas individualmente em Ureia 8 M e diluídas 20 vezes, após o que foram concentradas e dialisadas extensivamente contra tampão MES. Após a diálise, o rendimento médio para a tubulina alfa e beta foi de 0,7g por litro de cultura. Os anticorpos poli...
Tb. Os genes da tubulina alfa e beta de brucei foram expressos em E. coli usando o plasmídeo de expressão pTrP2 e ácido 3-ß-indoleacrílico como indutor. As tubulinas expressas foram analisadas por SDS-PAGE e confirmadas por Western blotting, em que tinham uma massa molecular aparente idêntica de 50 kDa. As tubulinas expressas foram dissolvidas individualmente em Ureia 8 M e diluídas 20 vezes, após o que foram concentradas e dialisadas extensivamente contra tampão MES. Após a diálise, o rendimento médio para a tubulina alfa e beta foi de 0,7g por litro de cultura. Os anticorpos policlonais foram produzidos em cada um dos 56 coelhos imunizados com três doses de tubulinas concentradas a 150¿g ou 450¿g por imunização por animal. O efeito desses anticorpos em T. b. o crescimento de brucei foi estudado por cultura de T. b. Brucei na corrente sanguínea se forma em até 25% dos anti-soros criados em coelho. Os anti-soros dos outros coelhos não inibiram T. b. crescimento de brucei em cultura. Estes resultados mostram que os anticorpos para a tubulina tripanossômica expressa em bactérias podem não ser citotóxicos para T. b. brucei.
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