Purificação do fator de crescimento expresso como proteína de fusão em E. coli - Ethiraj, Selvarajan
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Eschericia coli é um hospedeiro frequentemente utilizado, pois facilita a expressão de proteínas por sua relativa simplicidade, seu cultivo barato e rápido em alta densidade, a genética bem conhecida e o grande número de ferramentas moleculares compatíveis disponíveis. Observou-se que os marcadores de afinidade melhoram o rendimento da proteína, evitam a proteólise e aumentam a solubilidade in vivo. A purificação de proteínas marcadas com his é baseada no uso de um íon metálico quelado como um ligante de afinidade. As enterocinases são geralmente utilizadas para a digestão de proteínas de…mehr

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Produktbeschreibung
Eschericia coli é um hospedeiro frequentemente utilizado, pois facilita a expressão de proteínas por sua relativa simplicidade, seu cultivo barato e rápido em alta densidade, a genética bem conhecida e o grande número de ferramentas moleculares compatíveis disponíveis. Observou-se que os marcadores de afinidade melhoram o rendimento da proteína, evitam a proteólise e aumentam a solubilidade in vivo. A purificação de proteínas marcadas com his é baseada no uso de um íon metálico quelado como um ligante de afinidade. As enterocinases são geralmente utilizadas para a digestão de proteínas de fusão à medida que clivam o alvo no lado do terminal C da sequência de reconhecimento, permitindo a remoção completa das sequências de marcadores de afinidade. Foi realizado um estudo em que as células de E. coli foram lisadas por ultra-sonicação para recuperar a proteína de fusão solúvel e, em seguida, filtradas por filtração de fluxo tangencial (TFF) usando módulo de cassete de placa plana. A proteína filtrada foi purificada usando cromatografia de troca aniônica seguida por cromatografia de pseudoafinidade. A proteína de fusão foi clivada por digestão com enteroquinase recombinante para separar o parceiro de fusão da proteína de interesse. A recuperação geral da proteína desejada foi de 24,7%.
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Autorenporträt
El señor E. SELVARAJAN Actualmente es investigador asociado en la Escuela de Biociencias y Tecnología, Universidad VIT, Vellore, Tamil Nadu, India.Su experiencia en biotecnología de alimentos.Su investigación se centra en la producción de leche sin lactosa.Después de su maestría en tecnología en biotecnología (Universidad SASTRA), trabajó en BIOZEEN como aprendiz patrocinado por DBT, India.