Purificazione del fattore di crescita espresso come proteina di fusione in E. coli
Purificazione del fattore di crescita insulino-simile espresso come proteina di fusione in pBR322 VECTOR IN E.Coli
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Eschericia coli è un ospite di uso frequente, poiché facilita l'espressione delle proteine ¿¿grazie alla sua relativa semplicità, alla sua coltivazione rapida e poco costosa ad alta densità, alla ben nota genetica e al gran numero di strumenti molecolari compatibili disponibili. È stato osservato che i tag di affinità migliorano la resa proteica, prevengono la proteolisi e aumentano la solubilità in vivo. La purificazione delle proteine ¿¿con tag si basa sull'uso di uno ione metallico chelato come ligando di affinità. Le enterokinasi sono generalmente utilizzate per la digestione d...
Eschericia coli è un ospite di uso frequente, poiché facilita l'espressione delle proteine ¿¿grazie alla sua relativa semplicità, alla sua coltivazione rapida e poco costosa ad alta densità, alla ben nota genetica e al gran numero di strumenti molecolari compatibili disponibili. È stato osservato che i tag di affinità migliorano la resa proteica, prevengono la proteolisi e aumentano la solubilità in vivo. La purificazione delle proteine ¿¿con tag si basa sull'uso di uno ione metallico chelato come ligando di affinità. Le enterokinasi sono generalmente utilizzate per la digestione delle proteine ¿¿di fusione poiché scindono il bersaglio sul lato terminale C della sequenza di riconoscimento consentendo la rimozione completa delle sequenze di tag di affinità. È stato condotto uno studio in cui le cellule di E. coli sono state lisate mediante ultrasuoni per recuperare la proteina di fusione solubile e quindi filtrate mediante filtrazione a flusso tangenziale (TFF) utilizzando il modulo cassetta a piastra piatta. La proteina filtrata è stata purificata utilizzando cromatografia a scambio anionico seguita da cromatografia di pseudo affinità. La proteina di fusione è stata scissa mediante digestione con enterokinasi ricombinante per separare il partner di fusione dalla proteina di interesse. Il recupero complessivo della proteina desiderata è risultato essere del 24,7%.
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