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La presente investigación se diseñó con el objetivo de formular películas de quitosano (CH) mediante reticulación con citrato de sodio (Nacit), tripolifosfato de sodio (NaTPP) o sulfato de condroitina (CS) que sean capaces de simular la permeabilidad in vitro de la droga polar modelo, el 5-Fluorouracilo (5-FU) y la droga no polar, la indometacina (INDO) a través de la rata/conejo o la epidermis humana. El diseño de optimización se empleó para identificar y optimizar varias variables de proceso y formulación que influyen significativamente (p<0,05) en la permeación de ambas drogas a través de estas películas. Además, se evaluaron los resultados en cuanto al efecto de la densidad de enlace cruzado sobre la permeación in vitro mediante el análisis espectroscópico de absorción atómica para el análisis espectroscópico de Na+, DSC e IR. Se encontró que la permeación in vitro tanto de 5-FU como de INDO a través de formulaciones optimizadas de películas reticuladas con CH-NaTPP, CH-Nacit o CH-CS era comparable a la obtenida a través de láminas epidérmicas de ratas, conejos y humanos. Estos resultados indican que estas películas optimizadas de CH tienen un potencial para ser desarrolladas como sustituto de las láminas epidérmicas de cadáveres animales y humanos para estudios preliminares de permeación in vitro.