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L'intégration aléatoire du vecteur FIVE dans le chromosome de l'agent pathogène est réalisée par mutagenèse insertion-duplication afin de créer un pool d'agents pathogènes recombinants (ce qui signifie que le gène dans lequel le vecteur s'est inséré par recombinaison homologue n'est pas perturbé). Les recombinants peuvent être sélectionnés à l'aide de la résistance aux antibiotiques, étant donné qu'un marqueur supplémentaire se trouve également sur la construction IVET intégrée. Les clones regroupés sont ensuite inoculés à la souris. Les deux principaux types de stratégies de piège à promoteur FIVETE sont (a) la complémentation de la mutation auxotrophe et (b) l'expression de la résistance aux antibiotiques. Seules les bactéries qui contiennent le marqueur sélectif fusionné à un gène transcriptionnellement actif dans l'hôte sont capables de survivre. Après une période d'infection appropriée, les bactéries qui expriment le marqueur sont isolées du poumon, du foie, de la rate et du tissu mésentérique.