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Las propiedades fotoactivas de las porfirinas irradiadas con luz de longitud de onda adecuada, y la selectividad de las células malignas para acumular porfirinas a partir del precursor ácido 5-aminolevúlico (ALA), conforman la base de la terapia fotodinámica (TFD) de tumores, mediante la cual se generan especies reactivas de oxígeno (ROS) que inducen la muerte celular. El cultivo en esferoides multicelulares (EMCs) simula las condiciones de microtumores independientemente de la vasculatura. En este trabajo se establecieron los factores involucrados en la mayor resistencia a la muerte celular por TFD en EMCs de la línea de adenocarcinoma de pulmón humano A549 respecto del cultivo en monocapa, teniendo en cuenta que la dosis lumínica necesaria para reducir la viabilidad celular en un 50% post-TFD (DL50) es de 7 min en la monocapa y 10 min en los EMCs. El estudio de la generación de ROS reveló que la producción de oxígeno singulete y anión superóxido es mucho menor en los EMCs que en la monocapa , indicando que la disponibilidad de oxígeno en el interior del esferoide sería el factor que limita la efectividad de la TFD en una configuración tridimensional.