Withania somnifera Dunal (Ashwagandha) est une plante médicinale indienne qui possède des propriétés pharmacologiques significatives telles que des effets adaptogènes, antioxydants, hypoglycémiques et anti-accidents vasculaires cérébraux. Plusieurs de ses chimiotypes comprennent NMITLI-101, NMITLI-118, NMITLI-128. Ce travail présente des études phytochimiques et analytiques sur le NMITLI118RT+, un médicament candidat sous l'égide du CSIR (dérivé d'un nouveau chémotype de W. somnifera). Nous présentons ici le développement, la validation et les applications d'une méthode CLHP isocratique simple, rapide et fiable pour la quantification du Withanolide A dans le NMITLI118RT+ sur une colonne CN utilisant le gliclazide comme étalon interne. Cette méthode permet de détecter le Withanolide A en 3,8 minutes environ et le gliclazide (étalon interne) en 4,8 minutes environ, avec une gamme de linéarité de 2 à 20 µg/mL. Une deuxième méthode rapporte le développement et la validation d'une méthode isocratique simple pour l'estimation simultanée du Withanolide A et de la Withanone (marqueurs de lactone sesquiterpénique) établie sur une colonne C-18 ; 3µ qui pourrait détecter le Withanolide A et la Withanone à des temps de rétention d'environ 20,7 min et 21,6 min respectivement dans la gamme de linéarité de 2-50 µg/mL pour les deux.