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Bactérias gram-negativas são importantes agentes etiológicos de doenças nas culturas agrícolas. A regulação da virulência desses fitopatógenos é frequentemente mediada pelo mecanismo de controle da expressão gênica dependente da densidade populacional, o quorum sensing. Desta maneira, o presente estudo objetivou avaliar o potencial de actinobactérias (gram-positivos) endofíticas para inibir esse mecanismo em gram-negativos. Isolados pertencentes às espécies Microbacterium testaceum, Microbacterium phyllosphaerae e Rhodococcus erythropolis apresentaram maior potencial para a inibição da comunicação célula-célula. Este é o primeiro relato de M. phyllosphaerae com essa característica. Além disso, os perfis genômicos de M. testaceum, a espécie predominante entre as actinobactérias deste estudo, foram analisados por PFGE e revelaram um alto polimorfismo entre os isolados. Neste trabalho, foi demonstrado que actinobactérias endofíticas podem inibir o quorum sensing de gram-negativos e, portanto, ser úteis para o desenvolvimento de estratégias sustentáveis para o controle de fitopatógenos.