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Debido al incremento en casos reportados de crímenes cometidos bajo el efecto de drogas de abuso y evidencias de intoxicaciones accidentales, suicidas y homicidas asociadas al consumo de estas, se hace necesario el desarrollo de técnicas analíticas, selectivas, sensibles y confiables para la determinación de las drogas en muestras biológicas en casos de interés forense. Se validó un método para la determinación de morfina, codeína, 6-acetilmorfina y metadona, en orina y sangre. Los porcentajes de recuperación fueron superiores a 56% y 63% para todos los analitos evaluados en orina y sangre respectivamente. Las curvas de calibración fueron lineales con coeficientes de correlación superiores a 0.98, dentro del rango dinámico asociado a las concentraciones letales reportadas en la literatura. Las CMD y CMC de cada analito se determinaron estadísticamente a partir de las curvas de calibración construidas. La precisión tuvo CV inferiores a 24% para los analitos. Se obtuvo para codeínaen orina 78.9% de valor predictivo positivo y en sangre 100%, igual que para morfina en orina. El método desarrollado se aplicó exitosamente para la resolución de casos forenses.