Eschericia coli is een veel gebruikte gastheer, omdat het eiwitexpressie vergemakkelijkt door zijn relatieve eenvoud, zijn goedkope en snelle teelt met hoge dichtheid, de bekende genetica en het grote aantal compatibele moleculaire tools die beschikbaar zijn. Er is waargenomen dat affiniteitstags de eiwitopbrengst verbeteren, proteolyse voorkomen en de oplosbaarheid in vivo verhogen. De zuivering van his-tag-eiwitten is gebaseerd op het gebruik van een gechelateerd metaalion als affiniteitsligand. Enterokinasen worden in het algemeen gebruikt voor de vertering van fusie-eiwitten omdat ze het doelwit aan de C-terminale zijde van de herkenningssequentie splitsen, waardoor volledige verwijdering van affiniteitslabelsequenties mogelijk is. Er werd een studie uitgevoerd waarin E.coli-cellen werden gelyseerd door middel van ultrasone trillingen om oplosbaar fusie-eiwit terug te winnen en vervolgens werden gefilterd door tangentiële stroomfiltratie (TFF) met behulp van een vlakke plaatcassettemodule. Het gefiltreerde eiwit werd gezuiverd met behulp van anionenuitwisselingschromatografie gevolgd door pseudo-affiniteitschromatografie. Het fusie-eiwit werd gesplitst door recombinante enterokinase-digestie om de fusiepartner te scheiden van het eiwit van belang. De totale terugwinning van het gewenste eiwit bleek 24,7% te zijn.
Hinweis: Dieser Artikel kann nur an eine deutsche Lieferadresse ausgeliefert werden.
Hinweis: Dieser Artikel kann nur an eine deutsche Lieferadresse ausgeliefert werden.