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A infecção persistente por tipos oncogênicos de Papilomavírus Humano (HPV) é necessária para o desenvolvimento do câncer cervical e colabora no estabelecimento de outros tumores anogenitais e orofaríngeos. A utilização de Virus-like Particles (VLPs) produzidas a partir da superexpressão da proteína L1 do capsídeo viral em sistemas recombinantes é a base das atuais vacinas anti-HPV. Apesar de eficazes, o elevado custo de produção e o baixo espectro de ação de tais vacinas comprometem seu estabelecimento. Neste trabalho avaliamos a produção extracelular da proteína L1 de HPV-16 a partir de células de Pichia pastoris e mediante a utilização dos sistemas baseados no promotor induzível AOX1 e no promotor constitutivo PGK1. A secreção da proteína L1 no meio de cultura foi confirmada através do emprego de anticorpo monoclonal anti-L1 em ensaios de colony, dot e western blotting. Embora otimizações sejam necessárias para aumentar o rendimento de produção, o sistema não comercial baseado no promotor constitutivo PGK1 representa uma atrativa plataforma para produção da proteína L1 com fins vacinais.