Os receptores toll like-9 (TLR9) são importantes proteínas de reconhecimento de padrões na imunidade inata contra vírus e apresentam uma aparente expressão gradual que pode sugerir o grau de neoplasia intraepitelial cervical (NICs), fazendo com que sejam considerados potenciais biomarcadores. Diante disso, a tecnologia da PCR em tempo real representa uma ferramenta importante, podendo ser usada na investigação da expressão deste receptor na carcinogênese cervical, auxiliando desta forma, no programa de rastreio das NICs. Neste contexto, o objetivo deste estudo foi validar um par de primers para quantificação da expressão do gene TLR9 em PCR em tempo real. O primeiro passo do estudo foi avaliar a especificidade dos primers na PCR convencional e posteriormente foram feitos experimentos para obtenção da curva padrão na PCR em tempo real, no intuito de mensurar o limite de detecção, limite de quantificação do alvo e desempenho da reação.