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Se evaluó la producción de etanol a partir de un proceso por carga con monocultivo de Kluyveromyces marxianus var. marxianus ATCC 8554 y con cultivo mixto de K. marxianus y Saccharomyces cerevisiae ATCC 4921. Los bioprocesos con cultivo mixto se llevaron a cabo con inóculos simultáneos, ambas levaduras desde el inicio de la fermentación, e inóculos secuenciales, K.marxianus desde el inicio y S. cerevisiae inoculado a las 2 h. Los ensayos se realizaron por triplicado a un pH de 5,0 y temperatura de 30°C. Se empleó un biorreactor Bioflo 4000 con un volumen de trabajo de 3 L y controles automáticos de pH, temperatura y velocidad de agitación.Los ensayos con cultivos mixtos mostraron mayor concentración de biomasa final y mayor producción de etanol que el monocultivo, y el cultivo mixto con inoculo simultáneo mostró mayor productividad de etanol (0,8507 ± 0,0094 kg m-3 h-1) que el cultivo mixto secuencial(0,9563 ± 0,0234 kg m-3 h-1). La mayor concentración de etanol fue de 21,039 ± 0,515 kg/ m-3. Estos resultados indicaron que esta metodología representa una técnica prometedora para la producción de etanol en suero desproteinizado.