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A melatonina é uma indolamina derivada a partir do aminoácido triptofano, produzida na glândula pineal, caracteriza-se por apresentar a capacidade de seqüestrar espécies reativas de oxigênio (ROS). Deste modo, este estudo foi realizado com o objetivo de avaliar o efeito da suplementação de melatonina ao diluidor Tris-Gema sobre a criopreservação do sêmen bovino. Foram utilizados 54 ejaculados de touros Guzerá. O sêmen foi diluído em TRIS-gema, com a adição de melatonina, nas seguintes concentrações experimentais: grupo controle - 0miM; Melatonina - 10miM; Melatonina - 100miM; Melatonina - 200miM. Posteriormente, foram envasados em palhetas de 0,25mL e criopreservados. Após descongelação a 37°C por 30 segundos, as alíquotas foram analisadas quanto ao Teste de Termorresistência Rápida (TTR), à integridade de membrana plasmática (MP),acrossoma (Ac), potencial de membrana mitocondrial (PMM) e cinética espermática. Observou-se que as percentagens de motilidade foram superiores (p0,05)nos grupos controle (27,21 + 15,93) e 10µM (23,07 + 15,24). Os diluidores do grupo controle (75,31 + 28,86) e 10µM (75,26 + 26,44) não diferiram quanto à integridade da MP.